Diferencia entre revisiones de «Electroforesis en gel»
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| + | '''Electroforesis en gel''' es una técnica para la separación de moléculas (tales como proteínas, ADN o fragmentos de ARN) de acuerdo con el tamaño y consiste en la migración de las partículas en un gel determinado durante la aplicación de una diferencia de potencial.<ref>{{cita libro|autor=Conoley, Chris; Hills, Phil|título=Chemistry|año=2008|edición=3ª|editorial=Harper Collins Publishers|ubicación=London|página=377|isbn=978-0-00-726748-4}}</ref> Las moléculas de ADN lineales se separan según el tamaño, cuando son sometidas a un campo eléctrico a través de una matriz de gel.<ref name=Watson>{{cita libro|autor=Watson, James D.; Baker, Tania A.; Bell, Stephen P.; Gann, Alexander; Levine, Michael; Losick, Richard|título=Molecular Biology of the Gene|edición=5ª|editorial=Pearson, Benjamin Cummings|ubicación=San Francisco, CA|año=2004|página=648|isbn=0-8053-4635-X}}</ref> Esta técnica permite a los biólogos medir el tamaño de los fragmentos de ADN sin secuenciación ya que, como la velocidad de migración es una función de la longitud del fragmento, la medición de las distancias de migración nos permite estimar los tamaños.<ref>{{cita libro|autor=Pevzner, Pavel A.|título=Computational Molecular Biology: An Algorithmic Approach|ubicación=Cambridge, Massachusetts|editorial=The MIT Press|año=2000|página=273|isbn=0-262-16197-4}}</ref> Los sistemas de secuenciación en gel hacen uso de fuentes de alto voltaje (1500-3000V).<ref name=luke>{{cita libro|autor=Alphey, Luke|título=DNA Sequencing: From Experimental Methods to Bioinformatics|año=1997|ubicación=New York|editorial=Springer/Bios Scientific Publishers|página=53-62|isbn=0-387-91509-5}}</ref> Después de la electroforesis fue terminada, las moléculas de ADN pueden ser visualizadas por tinción del gel con colorantes fluorescentes tales como bromuro de etidio.<ref name=Watson /> La primera vez que se aplicó la electroforesis en gel en la genética de poblaciones fue en 1966 por Lewontin y Hubby.<ref>{{cita libro|autor=Lester, Lane P.; Bohlin Raymond G.|título=The Natural Limits to Biological Change|editorial=Probe Books|año=1989|edición=2ª|ubicación=Dallas, Texas|página=61|isbn=0-945241-06-2}}</ref> | ||
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| − | + | Cuando se aplica corriente eléctrica, las moléculas grandes se mueven más lentamente a través del gel, mientras que las moléculas más pequeñas se mueven más rápidamente. | |
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| − | + | Después de la electroforesis se ha completado, las moléculas en el gel se puede teñir con colorante para hacerlos visibles. El ADN puede ser visualizado utilizando bromuro de etidio, que, cuando se intercalan en el ADN, es fluorescente bajo luz ultravioleta. | |
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==Tipos de gel== | ==Tipos de gel== | ||
| − | [[Image:Gel_electrophoresis.PNG|thumb|200px| | + | [[Image:Gel_electrophoresis.PNG|thumb|200px|Las bandas de DNA separados por electroforesis en gel de poliacrilamida y se hace visible por tinción con bromuro de etidio y visualización bajo luz ultravioleta.]] |
* '''Agarose''' | * '''Agarose''' | ||
* '''Poliacrilamida''' | * '''Poliacrilamida''' | ||
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| − | * [http://openwetware.org/wiki/Polyacrylamide_gel_electrophoresis Polyacrylamide gel electrophoresis] | + | * [http://openwetware.org/wiki/Polyacrylamide_gel_electrophoresis Polyacrylamide gel electrophoresis] en la http://openwetware.org |
| − | * [http://www.colorado.edu/Outreach/BSI/pdfs/gel_electrophoresis.pdf gel electrophoresis] | + | * [http://www.colorado.edu/Outreach/BSI/pdfs/gel_electrophoresis.pdf gel electrophoresis] en la University of Colorado Boulder |
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Revisión actual del 17:38 30 mar 2013
Electroforesis en gel es una técnica para la separación de moléculas (tales como proteínas, ADN o fragmentos de ARN) de acuerdo con el tamaño y consiste en la migración de las partículas en un gel determinado durante la aplicación de una diferencia de potencial.[1] Las moléculas de ADN lineales se separan según el tamaño, cuando son sometidas a un campo eléctrico a través de una matriz de gel.[2] Esta técnica permite a los biólogos medir el tamaño de los fragmentos de ADN sin secuenciación ya que, como la velocidad de migración es una función de la longitud del fragmento, la medición de las distancias de migración nos permite estimar los tamaños.[3] Los sistemas de secuenciación en gel hacen uso de fuentes de alto voltaje (1500-3000V).[4] Después de la electroforesis fue terminada, las moléculas de ADN pueden ser visualizadas por tinción del gel con colorantes fluorescentes tales como bromuro de etidio.[2] La primera vez que se aplicó la electroforesis en gel en la genética de poblaciones fue en 1966 por Lewontin y Hubby.[5]
Operación
Los ácidos nucleicos tienen un esqueleto fosfodiéster lo que significa que llevan numerosos grupos fosfato cargados negativamente, de manera que, cuando están presentes en un campo eléctrico tienden a migrar hacia el electrodo positivo.[6] Al migrar por un gel poroso, las moléculas de ácido nucleico pueden ser separadas según su tamaño.[6] Las moléculas que deben ser clasificadas se dispensan en un pozo o cámara en el material de gel. El gel se coloca en una cámara de electroforesis, que luego se conecta a una fuente de alimentación..
Cuando se aplica corriente eléctrica, las moléculas grandes se mueven más lentamente a través del gel, mientras que las moléculas más pequeñas se mueven más rápidamente.
Después de la electroforesis se ha completado, las moléculas en el gel se puede teñir con colorante para hacerlos visibles. El ADN puede ser visualizado utilizando bromuro de etidio, que, cuando se intercalan en el ADN, es fluorescente bajo luz ultravioleta.
Tipos de gel
- Agarose
- Poliacrilamida
- Almidón
Véase también
- Polyacrylamide gel electrophoresis en la http://openwetware.org
- gel electrophoresis en la University of Colorado Boulder
Referencias
- ↑ Conoley, Chris; Hills, Phil (2008). Chemistry (3ª edición). London: Harper Collins Publishers. p. 377. ISBN 978-0-00-726748-4.
- ↑ 2,0 2,1 Watson, James D.; Baker, Tania A.; Bell, Stephen P.; Gann, Alexander; Levine, Michael; Losick, Richard (2004). Molecular Biology of the Gene (5ª edición). San Francisco, CA: Pearson, Benjamin Cummings. p. 648. ISBN 0-8053-4635-X.
- ↑ Pevzner, Pavel A. (2000). Computational Molecular Biology: An Algorithmic Approach. Cambridge, Massachusetts: The MIT Press. p. 273. ISBN 0-262-16197-4.
- ↑ Alphey, Luke (1997). DNA Sequencing: From Experimental Methods to Bioinformatics. New York: Springer/Bios Scientific Publishers. p. 53-62. ISBN 0-387-91509-5.
- ↑ Lester, Lane P.; Bohlin Raymond G. (1989). The Natural Limits to Biological Change (2ª edición). Dallas, Texas: Probe Books. p. 61. ISBN 0-945241-06-2.
- ↑ 6,0 6,1 Strachan, Tom; Read, Andrew P (2011). Human Molecular Genetics (4ª edición). New York: Garland Science. p. 204-205. ISBN 978-0-8153-4149-9.
