Electroforesis en gel
Electroforesis en gel es una técnica para la separación de moléculas (tales como proteínas, ADN o fragmentos de ARN) de acuerdo con el tamaño y consiste en la migración de las partículas en un gel determinado durante la aplicación de una diferencia de potencial. Las moléculas de ADN lineales se separan según el tamaño, cuando son sometidas a un campo eléctrico a través de una matriz de gel.[1] Esta técnica permite a los biólogos medir el tamaño de los fragmentos de ADN sin secuenciación ya que, como la velocidad de migración es una función de la longitud del fragmento, la medición de las distancias de migración nos permite estimar los tamaños.[2] Los sistemas de secuenciación en gel hacen uso de fuentes de alto voltaje (1500-3000V).[3] Después de la electroforesis fue terminada, las moléculas de ADN pueden ser visualizadas por tinción del gel con colorantes fluorescentes tales como bromuro de etidio.[1]
Contenido
Operación
Os ácidos nucleicos apresentam um esqueleto fosfodiéster significando que eles carregam numerosos grupos fosfato carregados negativamente, de modo que, quando presentes em um campo elétrico eles tenderão a migrar para a direção do eletrodo positivo.[4] Ao migrar por um gel poroso, as moléculas de ácidos nucleicos podem ser separadas de acordo com o tamanho.[4] As moléculas a ser classificados são dispensadas em um poço ou câmara no material de gel. O gel é colocado numa câmara de electroforese, o qual é então ligado a uma fonte de alimentação.
Quando a corrente elétrica é aplicada, as moléculas de maiores dimensões se movem mais lentamente através do gel, enquanto que as moléculas menores movem mais rapidamente.
Após a eletroforese ter se completado, as moléculas no gel podem ser tingidas com corante para torná-las visíveis. O ADN pode ser visualizado usando-se o brometo de etídio, que, quando intercalado no ADN, fica fluorescente sob a luz ultravioleta.
Tipos de gel
- Agarose
- Poliacrilamida
- Amido
Ver também
- Polyacrylamide gel electrophoresis na http://openwetware.org
- gel electrophoresis na University of Colorado Boulder
Referencias
- ↑ 1,0 1,1 Watson, James D.; Baker, Tania A.; Bell, Stephen P.; Gann, Alexander; Levine, Michael; Losick, Richard (2004). Molecular Biology of the Gene (5ª edición). San Francisco, CA: Pearson, Benjamin Cummings. p. 648. ISBN 0-8053-4635-X.
- ↑ Pevzner, Pavel A. (2000). Computational Molecular Biology: An Algorithmic Approach. Cambridge, Massachusetts: The MIT Press. p. 273. ISBN 0-262-16197-4.
- ↑ Alphey, Luke (1997). DNA Sequencing: From Experimental Methods to Bioinformatics. New York: Springer/Bios Scientific Publishers. p. 53-62. ISBN 0-387-91509-5.
- ↑ 4,0 4,1 Plantilla:Citar livro
