Electroforesis en gel

Esta caixa cheia de líquido e alimentada por uma fonte de energia é usada ​​para eletroforese em gel.

Eletroforese em gel é uma técnica de separação de moléculas (tais como proteínas, ADN, ou fragmentos de ARN) de acordo com o tamanho e que envolve a migração de partículas em um determinado gel durante a aplicação de uma diferença de potencial. As moléculas de ADN linear são separadas de acordo com o tamanho, quando submetidas a um campo elétrico por meio de uma matriz de gel. Esta técnica permite aos biólogos medir o tamanho dos fragmentos de ADN sem os sequenciar uma vez que, como a velocidade de migração é uma função do tamanho do fragmento, a medida das distâncias de migração permite se estimar estes tamanhos. Os sistemas de seqüenciamento em gel utilizam fontes de alta tensão (1500-3000V). Após a electroforese se completar, as moléculas de ADN podem ser visualizadas por coloração do gel com corantes fluorescentes, como brometo de etídio.

Funcionamento

Os ácidos nucleicos apresentam um esqueleto fosfodiéster significando que eles carregam numerosos grupos fosfato carregados negativamente, de modo que, quando presentes em um campo elétrico eles tenderão a migrar para a direção do eletrodo positivo. Ao migrar por um gel poroso, as moléculas de ácidos nucleicos podem ser separadas de acordo com o tamanho. As moléculas a ser classificados são dispensadas ​​em um poço ou câmara no material de gel. O gel é colocado numa câmara de electroforese, o qual é então ligado a uma fonte de alimentação.

Preparação para a realização da eletroforese

Quando a corrente elétrica é aplicada, as moléculas de maiores dimensões se movem mais lentamente através do gel, enquanto que as moléculas menores movem mais rapidamente.

Após a realização da eletroforese os fragmentos estão separados conforme o tamanho.

Após a eletroforese ter se completado, as moléculas no gel podem ser tingidas com corante para torná-las visíveis. O ADN pode ser visualizado usando-se o brometo de etídio, que, quando intercalado no ADN, fica fluorescente sob a luz ultravioleta.

Após a coloração com brometo de etídio e uso de luz ultra-violeta.

Tipos de gel

A eletroforese em gel é uma técnica utilizada para separar moléculas de ADN, ARN, ou proteínas. As bandas de DNA vistas aqui são visíveis através da coloração com brometo de etídio e visualização sob luz ultra-violeta.

• Agarose
• Poliacrilamida
• Amido

Ver também

• Polyacrylamide gel electrophoresis na http://openwetware.org
• gel electrophoresis na University of Colorado Boulder

Categoria: técnica científica